Reducción, alquilación y precipitación con TCA de muestras en solución - CEQUIBIEM

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Reducción, alquilación y precipitación con TCA de muestras en solución

- Agregar DTT hasta una concentración final 10 mM en HCO3NH4 50 mM, pH=8 (se puede utilizar cualquier otro buffer de pH= 7-8, o en buffer con Urea 8M)
- Incubar 60 min a 56°C
- Agregar Iodoacetamida hasta una concentración final 20mM en HCO3NH4 50 mM (preparar en el día).
- Incubar 60 min en oscuridad a temperatura ambiente.
- Agregar 1/5 de volumen de TCA 100% por cada 1 volumen de muestra
- Dejar reposar durante 2 horas a -20°C
- Centrifugar al máximo en microcentrifuga durante 10 min
- Lavar el pellet 3 veces con Acetona a -20°C
- Dejar secar al aire durante 5 min.
- Guardar el pellet en frío.
 
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