Recomendamos preparar 250 ml de cada solución utilizando reactivos de alta calidad, libre de queratinas y contaminantes. Utilizar guantes y recipientes limpios.Solución Fijadora
30% (v/v) EtOH (también se puede utilizar 50%)
2% (v/v) ácido fosfórico (NB. De stock de 85%, ie 2.35 ml/100ml)
Solución de tinción
18% (v/v) MeOH (también se puede utilizar 34% (v/v)
17% (w/v)(NH4)2SO4
2% (v/v) ácido fosfórico
- Fijar las proteínas dejando el gel en solución fijadora de 3 hs a overnight
- Lavar 3 veces durante 30 minutos con H2O destilada
- Agregar solución de tinción y dejar en agitación durante una hora.
- Agregar 0.5 g/L Coomassie Blue G-250 en polvo al gel en la solución teñidora. La solución no debe ponerse azul, ya que es una suspensión coloidal. Agitar suavemente por 1-2 días. El recipiente debe estar tapado para evitar evaporación y contaminación. El gel no debe teñirse, solo las proteínas.
- Lavar el gel con H20 destilada.
- Guardar el gel en H20 destilada. Cortar las bandas o spots lo antes posible.
- Se puede realizar un desteñido con una solución 35%MeOH/2% ácido acético.